미생물 연구, 의약품 및 식품 품질 관리, 교육 등 다양한 분야에서 표준화된 균주는 필수적입니다. 특히 질병관리청 국가병원체자원은행(NCCP)에서 분양받는 균주는 그 신뢰성과 정확성으로 인해 많은 연구자들에게 선호됩니다. 이 글에서는 질병관리청 균주 분양 절차부터 동결건조된 표준균주 조제하고 활용하는 방법까지 상세히 안내해 드리겠습니다.
1. 질병관리청 국가병원체자원은행(NCCP) 균주 분양 절차
질병관리청 국가병원체자원은행(NCCP)은 국내외 주요 병원체 자원을 수집, 보존, 분양하여 연구 및 산업 발전에 기여하고 있습니다. 신뢰할 수 있는 표준균주를 확보하는 첫 단계는 바로 이곳에서 균주를 분양받는 것입니다.
- NCCP란?: 국가병원체자원은행은 질병관리청 산하 기관으로, 다양한 병원체 자원을 체계적으로 관리하고 연구자들에게 제공하는 역할을 합니다. 이곳에서 분양받는 균주는 엄격한 기준에 따라 관리되므로, 연구의 신뢰성을 높이는 데 기여합니다.
- 분양 신청 방법: 균주 분양은 온라인을 통해 신청할 수 있습니다. 질병관리청 통합관리시스템(https://is.kdca.go.kr)에 회원으로 가입한 후, 온라인 분양창구 시스템을 통해 신청해야 합니다 .
- 분양 절차 확인: 자세한 분양 절차는 국가병원체자원은행 홈페이지의 ‘분양절차’ 메뉴에서 확인하실 수 있습니다 . 교육용 참조균주 등 특정 목적의 균주 분양도 가능합니다 .
- 저작권 및 활용 유의사항: 질병관리청에서 제공하는 자료는 저작권법에 의해 보호받으며, 무단 복제 및 배포는 저작권 침해에 해당할 수 있습니다. 수익 목적으로 활용할 경우 사전 협의가 필요하며, 출처를 반드시 명시해야 합니다 .
2. 표준균주 조제의 중요성 및 기본 원칙
표준균주는 실험 결과의 정확성과 재현성을 보장하는 핵심 요소입니다. ‘표준물질(Reference Material: RM)’은 분석 과정에서 발생할 수 있는 기기 오차, 개인 오차 등을 검증하고 보정하기 위해 사용됩니다 . 따라서 정확한 표준균주 조제는 다음과 같은 기본 원칙을 준수해야 합니다.
- 무균(Aseptic) 환경 유지: 미생물 오염을 방지하기 위해 모든 과정에서 철저한 무균 조작이 필수적입니다. 클린 벤치 사용, 손 소독, 멸균된 기구 사용 등이 포함됩니다.
- 정확한 희석: 균주의 농도를 정확하게 맞추기 위해 정량적인 희석 과정이 중요합니다.
- 적절한 배지 선택: 균주의 특성에 맞는 배지를 사용하여 최적의 생장 환경을 제공해야 합니다.
- 보관 및 관리: 조제된 표준균주는 활성을 유지할 수 있도록 적절한 온도와 환경에서 보관해야 합니다.
3. 동결건조 표준균주 개봉 및 조제 방법 (단계별 가이드)
질병관리청에서 분양받는 표준균주는 대부분 동결건조(Freeze-drying)된 상태로 제공됩니다. 동결건조된 균주를 올바르게 개봉하고 조제하는 것은 매우 중요합니다.
3.1. 동결건조 균주 개봉 전 준비물
- 동결건조 표준균주 앰플
- 멸균 생리 식염수(0.8% NaCl) 또는 APW(Alkaline Peptone Water) 배지 (보통 0.3~0.5ml 또는 0.5ml 정도 필요)
- 멸균 피펫 및 피펫 팁
- 멸균된 배양 배지 (증균 배지 등)
- 알코올 솜 또는 70% 에탄올
- 백금 루프 또는 멸균 면봉
- 안전 장갑 및 보안경 (유리 앰플 개봉 시 파편 방지)
3.2. 동결건조 표준균주 개봉 및 현탁 과정
- 소독: 유리 앰플을 개봉하기 전, 교차 오염 방지를 위해 알코올 솜 등으로 앰플 외부를 깨끗하게 소독합니다 .
- 개봉: 유리 앰플의 커팅 선을 따라 손으로 힘을 가해 개봉합니다. 이때 유리가루가 발생할 수 있으므로 주의하고, 안전 장갑과 보안경을 착용하는 것이 좋습니다 .
- 현탁액 조제: 개봉된 앰플 내부에 동결건조된 균주가 보이지 않더라도 균이 존재합니다. 멸균된 생리 식염수 또는 APW 배지 0.3~0.5ml를 앰플에 첨가하여 균주를 녹입니다. Liquid-drying된 해양 박테리아의 경우 멸균 생리식염수가 아닌 특정 용매를 사용해야 할 수도 있으니, 균주 정보에 따라 확인해야 합니다 .
- 균주 용해 및 혼합: 피펫을 이용하여 용해액을 여러 번 흡입하고 배출하는 피펫팅 과정을 통해 균주와 용해액이 잘 섞이도록 합니다 .
3.3. 배양 및 활용
- 증균 배양: 용해된 표준균주 현탁액을 적절한 증균 배지에 접종하고 배양합니다. 예를 들어, APW 225ml에 용해된 표준균주 1ml를 접종하여 배양할 수 있습니다 .
- 균주 성장 확인: 배양 후, 투명했던 배지가 뿌옇고 탁하게 변했다면 균주가 잘 성장했음을 확인할 수 있습니다 .
- 희석 및 계수: 필요한 경우, 조제된 균주 현탁액을 희석하여 원하는 농도(예: E. coli의 경우 6×10^2 ~ 3×10^3 cfu/mL)로 맞추고 계수하여 정확한 농도를 확인합니다 .
- 보관: 조제된 표준균주는 장기 보관을 위해 글리세롤 스톡 등으로 만들어 초저온 냉동고에 보관하거나, 단기 사용을 위해 배양 후 냉장 보관하는 등 적절한 방법으로 관리해야 합니다.
4. 표준균주 활용 분야
표준균주는 다양한 분야에서 필수적으로 활용됩니다.
- 품질 관리: 식품, 의약품, 화장품 등의 미생물 오염 여부 검사 및 살균소독력 시험에 사용됩니다 .
- 연구 개발: 새로운 항생제, 소독제 개발 또는 미생물 특성 연구에 활용됩니다.
- 교육: 미생물학 실험 교육 및 실습에 사용됩니다.
- 진단: 병원체 진단 키트의 성능 평가 및 검증에 사용됩니다.
질병관리청에서 분양받은 표준균주를 올바르게 조제하고 활용하는 것은 연구의 신뢰성과 안전성을 확보하는 데 매우 중요합니다. 이 가이드가 표준균주 조제에 대한 궁금증을 해소하고 실제 작업에 도움이 되기를 바랍니다. 궁금한 점이 있다면 언제든지 다시 문의해주세요!
